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LAL试验急剧检测肉品细菌传染水平及鲜度的钻研
兀 征,王登临,董瑞鹏,杨红岩,张 蕾
(甘肃省动物检疫总站,甘肃兰州730030)
[提要]
对分歧鲜度的猪肉、牛肉、羊肉、鸡肉和鱼肉进行活菌总数、革兰氏阴性菌数、大肠菌群数及挥发性盐基氮(TVB_N)测定,并与LAL试验(鲎变形细胞溶化物试验)进行平行对比钻研,证实肉品的鲜杜纂其细菌总数、革兰氏阴性菌数及LAL指数呈负有关性。利用LAL试验可在短功夫(1～ 2幼时)内急剧判定肉品的细菌传染水平及鲜度,比传统的细菌造就计数法大大缩短了功夫,适合现场大批量肉品细菌传染水平及鲜度的急剧检测。
关键词: 肉品; 细菌传染; LAL试验; 急剧检测
中图分类号: S852.61 文件标识码: A 文章编号:1008_0589(2002)04_0304_06
Rapid Determination of Bacterial Contamination and Freshness of Meat by LAL TestWUZheng,WANG Deng_lin,DONG Rui_peng,YANG Hong_yan,ZHANG Lei(Gansu Provincial Animal Quarantine Station 730030,China)Abstract: Three different freshness samples of pork,beef,mutton,chicken and fish were examined for the numbers of total viable cells,gram_negative organisms,colifrom groups and the value of TVB_N.The resultswere comparedwith those of LALtest(limulus amoebocyte lysatetest).A positive correlationwas observed among the total viable cells,gram_negative organisms and LALindexes. It indicated that LALtest in-dex can be used to determine the bacterial contamination and freshness of the meat rapidly.
Key words: Meat;Bacterial contamination;LALtest;Rapid determination
肉品的卫生质量关系到宽大人民人民的食肉安全,而肉品细菌传染水平是反映其卫生质量的沉要指标� ＜本缯芳觳馊馄废妇舅郊跋识�,保障宽大消费者吃上“安心肉”,是动物检疫机构和卫生部门亟待解决的问题。目前,国内检测肉品新鲜度的重要步骤是感官鉴定和尝试室挥发性盐基氮(TVB_N)测定。感官鉴定的不及之处是了局不易量化,存在主观性和单方面性;TVB_N测定变动有时不敏感,肉品变质程杜纂肉品中TVB_N含量变动呈非正有关[1]。肉品细菌传染水平的检测是判定肉品鲜度的一种正确、客观的步骤,常用的为细菌活菌总数造就计数法和大肠菌群数测定法,但检验一个样品至少需用48幼时,费时费劲,很不适应于当今急剧肉品消费市场的检测[1]。
细菌的急剧检测,是指在检验样品的过程中,无需进行细菌的分离造就、生化试验等项主张检验,而是利用肯定的步骤在几幼时甚至更短的功夫内从样品中直接确定是否有细菌、细菌代谢产品存在,定性、定量,以达到对细菌传染水平进行判定的主张。国表对肉品中细菌急剧检测已成立了如基因探针检验、气相色谱及免疫酶等多种步骤,但这些步骤重要用于一些特异性病原菌的检测,很难全面反映肉品细菌的传染水平,且所需试剂昂贵,设备要求高,未能得到宽泛利用。
肉品细菌传染重要是由畜禽屠宰加工过程中革兰氏阴性肠路细菌所致。革兰氏阴性细菌胞壁中含有特殊成分—脂多糖,即为革兰氏阴性菌内毒素。鲎血细胞内含有可凝蛋白、B因子、凝固酶原等蛋白凝固因子,内毒素同j9游戏反映可形成肉眼可见的凝胶。国表学者已对利用LAL试验急剧检测肉品细菌传染水平进行了一些钻研[2,3]。国内一些钻研人员已把LAL试验用于食品中细菌内毒素含量的测定[4],但在检测肉品细菌传染水平及新鲜度方面的利用还未见报路。
1 资料和步骤
1.1 j9游戏 活络度为2EU/ml,由乐山j9游戏厂提供,批号为980708和981103。每批使用前按注明用内毒素阳性尺度品测定其活络度。
1.2 j9游戏溶化水及稀释液 j9游戏溶化水为乐山j9游戏厂出产的无热原水;稀释液为LAL试验检测阴性的注射用生理盐水。
1.3 细菌造就基及化学试剂 营养琼脂、乳糖胆盐发酵造就基、乳糖发酵造就基、伊红美蓝琼脂均为制品造就基;所用化学试剂均为分析纯级。
1.4 试验肉品 猪肉:市场采集的一级鲜度肉28份,二级鲜度肉2份;人为二级鲜度肉5份,人为变质肉11份;牛肉:市场采集的一级鲜度肉5份;人为二级鲜度肉5份,人为变质肉3份;羊肉:市场采集的一级鲜度肉3份;人为二级鲜度肉3份,人为变质肉2份;鸡肉:市场采集的一级鲜度肉6份;人为二级鲜度肉3份,人为变质肉2份;鱼肉(淡水鱼):市场采集的一级鲜度肉6份;人为二级鲜度肉2份,人为变质肉2份(人为二级鲜度和人为变质肉是将新鲜肉在室温下或在37℃恒温箱内搁置一按功夫后获得)。
1.5 LAL试验步骤 将j9游戏安瓿打开,参与0.1mlj9游戏溶化水使冻干物充分溶化,而后参与等量的待检肉样稀释液,摇匀置37± 0.5℃恒温水浴锅中静置60± 2分钟,取出后观察了局。同时设阴性对照、阳性对照及抑造对照。j9游戏凝固,呈胶冻状,倒转180度凝块不变形、不流动判为阳性。以出现阳性反映的肉样稀释液最高稀释倍数推算LAL指数(为使j9游戏产生凝固的肉样稀释液10倍稀释的最高稀释度指数)及肉毒素含量。
1.6 肉样处置和稀释 在肉样的精瘦肉处,从约4cm2大幼领域内由表层向深层取5g肉,置灭菌烧杯中剪碎,参与45ml生理盐水,放在磁力搅拌器上搅拌10～ 15分钟,即成1∶10的肉浸液。汲取肉浸液1ml参与装有9ml生理盐水的试管中,充分混匀,即成1∶102稀释液。凭据肉样新鲜水平(感官判定)顺次稀释至1∶105～ 1∶108。造备的稀释液同时用于微生物学试验及LAL试验。
1.7 新鲜度鉴定及TVB_N测定 按GB5009.44_85《肉与肉制品卫生尺度分析步骤》进行。
1.8 活菌总数及大肠菌群数测定 按GB4789.2_84和GB4789.3_84《食品卫生微生物学检验》进行。
1.9 革兰氏阴性菌数测定 选择3个稀释度肉样稀释液,接种伊红美蓝琼脂平板,每个稀释度接2个平板,每个平板接种0.2ml,摇匀后37℃造就48幼时,计数成长的菌落。
1.10 LAL指数与细菌总数、革兰氏阴性菌数、大肠菌群数及TVB_N值有关性对比分析 按生物统计学道理推算有关系数(r),分析LAL指数与其他试验数值之间的有关水平。
2 结 果
2.1 肉品感官鉴定、TVB_N和微生物学指标测定及LAL试验 由表1～ 5可见,分歧种类、分歧新鲜度的肉样88份,随着肉品新鲜度的降低,活菌总数、革兰氏阴性菌数及大肠菌群数对数值均相应升高,LAL指数和肉品内毒素含量也都相应升高;TVB_N值在猪肉、牛肉和羊肉也都出现相应变动;分歧新鲜度之间的各数值(除鸡鱼肉TVB_N值)有显著差距(p< 0.01)。一致鲜度牛、羊肉TVB_N值、活菌总数、革兰氏阴性菌数及LAL指数相近,无显著差距(p> 0.05);但分歧鲜度之间各数值有显著的差距(p< 0.01)。因而,牛肉和羊肉可用统一指标进行判定。
2.2 LAL指数与活菌总数、革兰氏阴性菌数、大肠菌群及TVB_V值有关性对比分析 用生物统计学道理推算有关系数(r),了局见表6。LAL指数与活菌总数、革兰氏阴性菌数、大肠菌群数及TVB_V值的有关系数(r)均值别离为0.955、0.948、0.813和0.363;与其有关性顺次为活菌总数>革兰氏阴性菌数>大肠菌群数> TVB_V值。
参考文件（略）
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